細胞實驗技術(shù)匯總-細胞生理活動的實驗觀察

【實驗?zāi)康摹?/span>

通過制片與觀察加深理解細胞的運動、吞噬等生理活動。

【實驗用品】

一、材料和標本 雄性蟾蜍、小白鼠、l％雞血懸液、6％淀粉肉湯、草履蟲。

二、器材和儀器 光鏡、2ml 注射器、載玻片、蓋玻片、解剖器材、滴管、移液管、試

管、玻璃片、黑紙。

三、試劑 0.3％臺盼蘭、1％剛果紅。

【實驗內(nèi)容】

一、細胞的吞噬活動

（一）原理

白細胞是機體防御系統(tǒng)中能游走的單位。它分為粒細胞系、單核細胞系、淋巴系三類。

它們有許多生理功能，如游走性、變形運動、趨化性、吞噬異物等。在白細胞中，以粒細

胞、單核細胞的吞噬活動較強，故稱此二類細胞為吞噬細胞。單核細胞由血液進入組織后

逐漸演變成巨噬細胞。吞噬細胞主要靠吞噬來處理異物。吞噬細胞首先由于趨化作用而向

異物游走，然后伸出偽足包圍異物，并發(fā)生內(nèi)吞作用形成吞噬泡將異物吞入細胞，繼而溶

酶體與吞噬泡融合消化異物。

（二）小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬活動的觀察

l．實驗前二天，每天向小鼠腹腔注射 6％淀粉肉湯 O．5～1ml（含 O．3％臺盼蘭，起標

記作用），以刺激腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細胞（此步由教師在實驗前進行完畢）。

2．實驗時，每組取一只經(jīng)上述處理的小鼠，腹腔注射 1％雞血懸液 0．5～1ml，注射

后輕揉小鼠腹部以使紅細胞懸液分散均勻。

3．1 小時后，用頸椎脫位法處死小鼠，迅速剖開小鼠腹壁，向腹腔注入 O．5ml～1ml

生理鹽水，用牙簽輕輕攪拌使生理鹽水與腹腔液混勻。

4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后蓋上蓋片。

5．鏡檢，高倍鏡下畫圖記錄所見結(jié)果。

二、暗視野觀察細胞的纖毛和鞭毛運動

（一）原理

暗視野照明法是一種不使照射被檢物體的光線直接進入物鏡的照明方法。常常用它來

觀察沒有染色的活體細胞或膠體粒子。利用此照明法，在鏡檢時不能直接看到通過標本的

照明光線，只有被檢物體反射或衍射的光線進入物鏡可以提高分辨率，在暗視野中可以看

到明亮的被檢物體的存在和運動，但它們的內(nèi)部結(jié)構(gòu)卻看不清楚。

（二）自制遮光板變普通顯微鏡為“簡單的暗視野顯微鏡”。

步驟：

1．將顯微鏡聚光器調(diào)到zui高位，用低倍鏡調(diào)焦至清楚。

2．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光圈的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。

3．放一塊透明玻璃于載物臺透光孔上，用尺子測量光圈孔徑。

4．按照圖 6--1 的形狀，用黑紙剪成與調(diào)節(jié)后光圈孔徑一樣大小的*遮光板。

5．將*遮光板放置在顯微鏡的濾光框上，即可進行標本的暗視野觀察。

注：如果使用高倍鏡觀察標本時，應(yīng)按高倍鏡調(diào)焦的視野大小重新制作*遮光板。

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圖 6—1 *遮光板

a．光圈孔徑

b．濾光片直徑

（三）觀察蟾蜍上頜粘膜上皮細胞的纖毛運動

步驟：

1．用搗毀腦脊髓的方法處死蟾蜍。

2．腹部向上將蟾蜍固定在蠟盤上。

3．沿蟾蜍二側(cè)口角向后剪開約 l 厘米，將下頜翻轉(zhuǎn)固定在腹部。

4．在上頜中線距喉頭 1 厘米處放置臘屑，觀察臘屑向什么方向移動？記錄臘屑開始移

動到消失的時間（見圖 6--2 蟾蜍口腔內(nèi)面圖）。

5．然后，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約 2×2cm 2 小塊，用牙簽挑取剪下的粘

膜，將縱切面貼于載片上。

6．加一滴生理鹽水于載玻片標本上，加蓋玻片，鏡檢。

圖 6—2 蟾蜍口腔內(nèi)面圖

結(jié)果：

1．在低倍鏡下觀察上頜粘膜細胞纖毛運動的現(xiàn)象。

2．換高倍鏡仔細觀察纖毛有規(guī)律的運動。

（四）暗視野觀察蟾蜍精子的鞭毛運動

步驟：

l．將前面實驗所用蟾蜍沿腹中線開腹，暴露出黃色圓柱狀精巢。

2．剪取一側(cè)精巢于盛有自來水的平皿中，用鑷子夾住精巢的一端，清洗去血污。

3．移取洗凈的精巢于另一干凈的平皿上，用眼科剪將精巢充分剪碎后，加入數(shù)滴自來

水混勻。

4．用吸管吸取平皿內(nèi)液體，滴一滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，稍待 2～3 分鐘于鏡下

觀察。

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結(jié)果：

1．在低倍鏡下可見到視野中有許多精子：頭部呈長錐形，尾為細長的線狀結(jié)構(gòu)。

2．置高倍鏡下觀察：可見有許多靠尾部鞭毛彎曲擺動驅(qū)使而運動的精子，測量鞭毛長

度。

三、草履蟲纖毛運動及食物泡的形成

圖 6—3 草履蟲

草履蟲是一種單細胞動物。蟲體由一個細胞組成，能執(zhí)行復(fù)雜的生理功能。

其體表，均勻密布纖毛，為運動細胞器。身體的前部有口溝，由前端斜向伸至體中部，

口溝的底部為胞口，下部一短管斜向后部而入胞質(zhì)，稱胞咽。纖毛有規(guī)律的擺動使食物在

胞咽聚結(jié)形成食物泡（吞噬泡），zui后脫離胞咽入胞質(zhì)。食物泡隨細胞質(zhì)由體后端到前端不

停環(huán)流，并與溶酶體（含酸性水解酶）融合，行使細胞內(nèi)消化。

根據(jù)食物泡中剛果紅指示劑的顏色變化（酸性時，為紅色；近中性時，為黃色；堿性時，

為藍色）。可以觀察到消化過程。

實驗步驟：

1．取一滴草履蟲培養(yǎng)液于載玻片上，放上幾根棉花纖維，以減慢草履蟲的運動。加蓋

玻片，制成臨時裝片。

2．觀察草履蟲的運動方式（觀察時光線可調(diào)暗些）：可見鏡下有許多樣似倒置鞋底的草

履蟲，體表纖毛不斷擺動，蟲體以其中軸左旋前進，若遇阻力則試觸后即刻回避而轉(zhuǎn)向。

3．觀察草履蟲的食物泡的形成：

1）在蓋玻片一側(cè)加一滴 l％的剛果紅指示劑，用 吸水紙從另一側(cè)吸引使指示劑進入蓋片

下方，選一運動較遲緩的草履蟲，移入高倍鏡觀察吞噬活動。

2）幾分鐘后可見草履蟲體內(nèi)出現(xiàn)許多紅色食物泡，隨著食物泡不停的在胞質(zhì)中環(huán)流，

食物不斷消化，泡內(nèi)酸性減弱或近中性，顏色漸漸呈黃色，食物泡漸小，zui后食物泡顏色

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呈藍色，不能被消化的殘渣，環(huán)流到身體后部的胞肛排出，不排出時不易見到胞肛。