DBCO-Polyethylene Glycol-Maleimidel活細胞標記：原理與應(yīng)用指南

【試劑描述】

DBCO-PEG-Mal 是一種異質(zhì)雙功能PEG交聯(lián)劑，其兩端分別帶有能發(fā)生生物正交反應(yīng)和經(jīng)典巰基偶聯(lián)的官能團。

（1）DBCO端： 一種環(huán)辛炔衍生物，能通過無銅點擊化學(xué)與疊氮基團高效、快速、特異性地反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑鍵。該反應(yīng)無需有毒的銅催化劑，非常適合活細胞標記和體內(nèi)應(yīng)用。

（2）Mal端： 馬來酰亞胺基團，能在中性pH條件下，特異性地與巰基反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硫醚鍵。這是修飾蛋白質(zhì)、多肽上半胱氨酸殘基的經(jīng)典方法。

（3）PEG間隔臂： 連接兩個反應(yīng)端，提供水溶性、生物相容性，并減少空間位阻。

簡單來說，它是一個“橋梁”，能同時連接一個帶疊氮基的分子和一個帶巰基的分子。

【試劑信息】

英文名稱：DBCO-PEG-Mal；DBCO-Polyethylene Glycol-Maleimide

英文別名：DBCO-Polyethylene Glycol-Mal；DBCO-PEG-Maleimide

中文名稱：二苯基環(huán)辛炔聚乙二醇馬來酰亞胺，二苯基環(huán)辛炔 PEG 馬來酰亞胺

分子量：1000，2000，3400，5000，10000，20000（可按需定制）

外觀：固體/粉末

規(guī)格：1g，5g，10g等

儲存條件：-20℃，干燥，避免頻繁解凍和冷凍

溶解性：溶于大部分有機溶劑，溶于水

運輸：低溫運輸

純度：95%+

供應(yīng)商：西安凱新生物科技有限公司

結(jié)構(gòu)式：

安全性：

操作時需佩戴防護裝備，避免接觸皮膚和眼睛。

如不慎接觸，請立即用大量清水沖洗，并尋求醫(yī)療幫助。

該試劑只用于科研

活細胞標步驟【溫馨提示：僅供參考】

（1）：細胞表面疊氮基團的代謝標記

細胞培養(yǎng)： 在培養(yǎng)皿或孔板中培養(yǎng)細胞至50-70%匯合度。

配制工作液： 將Ac4ManNAz溶解于DMSO中，配制成高濃度儲備液。用培養(yǎng)基將其稀釋至工作濃度（通常為50-100 μM）。

孵育標記： 移除舊培養(yǎng)基，加入含Ac4ManNAz的新鮮培養(yǎng)基。

孵育： 在細胞培養(yǎng)箱中（37°C, 5% CO?）孵育 24-72 小時，讓細胞有足夠時間將疊氮糖整合到表面糖蛋白上。

洗滌： 孵育結(jié)束后，用預(yù)熱的PBS輕柔洗滌細胞2-3次，去除未參與的疊氮糖。

第二步：DBCO-PEG-Mal與細胞表面疊氮基團的點擊反應(yīng)

配制DBCO-PEG-Mal工作液： 將DBCO-PEG-Mal溶解于無水DMSO中，配制成高濃度儲備液（如10 mM）。用預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基或PBS將其稀釋至工作濃度（通常為10-100 μM）。現(xiàn)用現(xiàn)配。

孵育： 移除PBS，向細胞中加入DBCO-PEG-Mal工作液。

點擊反應(yīng)： 在細胞培養(yǎng)箱中避光孵育30-90分鐘。DBCO與疊氮的反應(yīng)快速且高效。

洗滌： 反應(yīng)結(jié)束后，用預(yù)熱的PBS洗滌細胞2-3次，去除未反應(yīng)的DBCO-PEG-Mal。

第三步：馬來酰亞胺與巰基分子的偶聯(lián)反應(yīng)

準備巰基分子： 將帶有巰基的功能分子溶解在適當?shù)木彌_液（如無血清培養(yǎng)基或PBS，pH 6.5-7.5）中。確保緩沖液中不含其他含巰基的還原劑。

孵育： 向經(jīng)過第二步處理的細胞中加入巰基分子工作液。

Mal-巰基反應(yīng)： 在細胞培養(yǎng)箱中避光孵育30-60分鐘。

最終洗滌： 用預(yù)熱的PBS洗滌細胞2-3次，去除未反應(yīng)的巰基分子。

第四步：分析與檢測

根據(jù)所連接的功能分子進行后續(xù)檢測：

如果是熒光染料，可立即進行活細胞熒光成像或流式細胞術(shù)分析。

如果是生物素，可加入熒光標記的鏈霉親和素進行檢測。

如果是多肽或蛋白質(zhì)，可進行相應(yīng)的功能實驗或檢測。

【更多試劑】

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以上內(nèi)容均由西安凱新生物科技有限公司YNN編輯整理

該試劑僅用于科研實驗，不可用于人體