人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒使用說明書
BS-1708 人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒
一、試劑盒簡介
人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)原理，用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中PⅢNP的含量。PⅢNP是III型膠原蛋白合成過程中產生的肽段，其血清水平可作為肝臟纖維化和肝硬化的指標。
二、試劑盒組成
試劑盒通常包含以下組分(具體以實際包裝為準)：
酶標包被板：1×48孔或1×96孔(預包被捕獲抗體)
標準品：通常為凍干粉或液體，濃度范圍常見為62.5-4000pg/mL
樣品稀釋液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
檢測溶液A(生物素標記抗體)和檢測溶液B(HRP標記物)
TMB底物溶液和終止液
濃縮洗滌液(20-30倍)
封板膜和說明書
三、樣本處理要求
血清樣本：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，2000-3000轉/分離心20分鐘，收集上清。避免溶血和反復凍融。
血漿樣本：使用EDTA、檸檬酸鈉或肝素抗凝，采集后30分鐘內2-8℃離心(1000×g，15分鐘)。
組織勻漿：按1:9重量體積比加入PBS勻漿，5000×g離心5-10分鐘取上清。
細胞培養上清：直接1000×g離心20分鐘收集。
注意：NaN3會抑制HRP活性，含NaN3的樣品不能檢測。
四、實驗操作步驟
試劑準備：
使用前將所有試劑平衡至室溫(18-25℃)
按需稀釋濃縮洗滌液(如20ml濃縮液加580ml蒸餾水)
標準品梯度稀釋(常見7-8個濃度點)
加樣與孵育：
分別設空白孔、標準孔和樣品孔
加入標準品或樣品100μL/孔，37℃孵育30-90分鐘
洗板5次(每次靜置30秒)，拍干
檢測抗體孵育：
加入生物素標記抗體100μL/孔，37℃孵育60分鐘
再次洗板5次
顯色與終止：
加入TMB底物90μL/孔，37℃避光顯色15分鐘
加入終止液50μL/孔，立即測定
結果讀取：
使用酶標儀在450nm波長讀取OD值
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線
通過標準曲線計算樣品濃度
五、注意事項
操作規范：
不同批次試劑不可混用
避免底物接觸金屬器具
嚴格控溫和時間，建議做雙復孔
保存條件：
未開封試劑盒：部分組分-20℃保存，部分2-8℃保存(詳見標簽)
開封后：酶標板加干燥劑密封保存于-20℃，剩余試劑按標簽溫度保存
質量控制：
板內變異系數應<10%，板間變異系數<10%
回收率應在85%-115%范圍內
安全事項：
TMB底物有毒性，終止液有腐蝕性，需防護
避免直接接觸試劑，操作時穿戴防護裝備
六、技術參數
檢測范圍：常見62.5-4000pg/mL(不同品牌有差異)
靈敏度：檢測限通常≤25pg/mL
精密度：批內CV≤10%，批間CV≤15%
有效期：一般為6-12個月(以包裝標簽為準)
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