小鼠鈣調磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　本生一直視質量控制為企業的生命，追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業精神作為標準，以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發展目標，本生，您信任的合作伙伴！本生試劑盒

　　以下是小鼠鈣調磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒的實驗使用說明書：

　　一、試劑盒概述

　　?用途?：用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中小鼠鈣調磷酸酶(CaN)的含量。

　　?產地與品牌?：不同品牌的試劑盒可能產自不同地方，例如天津本生或天正信達生物。

　　BS-9284小鼠鈣調磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒

　　?包裝規格?：通常有48T和96T兩種規格。

　　?保存條件?：2~8℃保存。

　　?有效期?：一般為6個月，具體以說明書為準。

　　二、實驗原理

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠鈣調磷酸酶(CaN)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠鈣調磷酸酶(CaN)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

　　三、樣本處理及要求

　　?血清?：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　?血漿?：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2~8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　?組織勻漿?：用預冷的PBS(0.01M，pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

　　?細胞培養物上清或其它生物標本?：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　四、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含以下組件(具體以說明書為準)：

　　微孔酶標板

　　標準品

　　樣本稀釋液

　　檢測抗體-HRP

　　20×洗滌緩沖液

　　底物A、B

　　終止液

　　封板膜

　　說明書

　　自封袋

　　其他可能包含的配件(如空白稀釋板、橡膠手套等)

　　五、操作步驟

　　從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。

　　樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

　　除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

　　棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1分鐘，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

　　每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分鐘。

　　每孔加入終止液50μL，混勻后在30分鐘內用酶標儀在450nm處測定各孔的OD值。

　　六、注意事項

　　所有OD值建議減除空白值后再行計算，如空白OD低于0.1，也可以直接計算。

　　以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，手工繪制或用軟件繪制標準曲線，根據樣品OD值計算出相應含量，再乘上稀釋倍數即可。

　　在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應做標準曲線。

　　洗滌過程很關鍵，洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象，37℃水浴使結晶溶解后再配制洗滌液。

　　檢測時所有試劑都要恢復到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2個月內用完。

　　試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現絮狀物，屬正常現象，不影響結果判讀。

　　僅用于科研，不能用于臨床診斷。

　　請按照試劑盒說明書進行操作，以確保實驗結果的準確性。不同品牌的試劑盒在具體操作步驟和試劑組成上可能有所差異，因此在使用前務必仔細閱讀并遵循相應品牌的說明書。