Orbitrap高分辨質譜憑借其高分辨率、高質量精度和高靈敏度,在蛋白質組學、代謝組學等領域應用廣泛。
Orbitrap高分辨質譜的優點:
1.高分辨率:能達到高達120,000的分辨率,可區分質量非常接近的離子,能更準確地鑒定化合物的組成和結構,為復雜樣品的分析提供了有力支持。
2.高準確度:具備質量測量精度,如EASY-IC內標校正技術可實現連續5天質量偏移小于1ppm,這使得對化合物的定性分析更加可靠,有利于未知物的準確鑒定。
3.高靈敏度:電場軌道阱的設計能有效捕獲和積累離子,增加軌道上離子的數量,從而提高信號強度。還可通過提高軌道頻率和增加離子留存時間進一步提升靈敏度,能檢測到低濃度的樣品成分。
4.快速掃描速度:具有22H的掃描速度以及1.4H的極性切換掃描速度,能夠在較短時間內獲取大量數據,提高了分析效率,適用于高通量分析和快速變化樣品的檢測。
5.穩定性強:嶄新的離子路徑設計和高場Orbitrap的結合,保證了儀器性能的持續穩定,日復一日都能提供可靠的實驗結果,減少了因儀器波動帶來的誤差。
6.節省成本:儀器的穩定性不僅體現在數據質量上,還體現在節省維護成本方面。其質量穩定性減少了校準和維護的頻率,降低了人力和物力投入。
7.操作簡便:優化的軟件提高了易用性,讓用戶無需花費過多精力在儀器操作上,而是可以專注于研究內容,提高了工作效率。
8.體積小巧:體積約為QE系列的一半,為實驗室節省了寶貴的空間,使實驗室的空間布局更加靈活。
Orbitrap高分辨質譜的測定步驟:
1.樣本前處理
-樣本保存:組織樣本需快速冷凍并儲存于-80℃;細胞樣本應立即裂解以避免蛋白降解。
-蛋白提取與酶解:根據樣本類型選擇裂解液(如RIPA或8M尿素),經還原烷基化后,用Trypsin按1:50比例過夜酶解,并通過C18柱純化肽段以提高質譜兼容性。
2.色譜分離
-采用高效液相色譜對酶解后的肽段進行分離,減少基質干擾。
3.質譜參數設置
-分辨率:MS2階段建議設置為30,000-60,000以平衡靈敏度與分辨率。
-掃描模式:DIA模式通過預設m/窗口實現全肽段掃描,而PRM則靶向選擇目標肽段的前體離子及其碎片離子,適合高精度定量分析。
4.數據采集與分析
-原始數據需經過生物信息學分析,包括數據庫檢索、峰匹配及定量校正。引入穩定同位素內標可提升跨批次數據的一致性。