ASCH VAPOSCAN 經皮水分流失測量儀助力外用益生菌在特應性皮炎作用機制探索

「摘要」

副干酪乳桿菌是一種益生菌，對多種過敏性疾病具有積極作用，并可通過調節免疫發揮作用，其中樹突狀細胞是其關鍵靶標之一。

2025年7月，麻布大學獸醫藥理學實驗室的Mao Kaneki等研究團隊在Preprints.org預印本平臺發表了一篇題為“Topical Administration of a Mixed Microbial Culture of Lactobacillus paracasei, Pichia membranifaciens and Saccharomyces cerevisiae Significantly Inhibits the Development of Atopic Dermatitis in a Mouse Model Through IL-10 over Expression by Dendriti”的文獻。

該研究采用混合微生物培養物LS（含副干酪乳桿菌、膜狀畢赤酵母和釀酒酵母），通過特應性皮炎小鼠模型，評價LS經皮膚給藥的影響效果。方法上，利用小鼠樹突狀細胞系檢測IL-10和TNFα水平以評估免疫調節作用；在刺激的人表皮角質形成細胞中，通過IL-8和胸腺細胞因子的產生評價抗炎效應。在AD小鼠模型中，局部使用10% LS軟膏，每周記錄臨床癥狀、背部皮膚厚度及經表皮水分流失，并在尸檢后分析耳淋巴結的免疫反應。結果顯示，LS處理增強了DC2.4細胞分泌IL-10和TNFα的能力，同時降低了刺激的HaCaT細胞產生IL-8和TARC。在治療組中，癥狀、皮膚厚度或TEWL未見明顯改變，但局部淋巴結中IgE陽性B細胞數量和IL-4水平有所下降。預防性涂抹LS減輕了AD癥狀。結果表明，LS通過免疫調節和抗炎作用能阻止AD的發展。 

實驗材料與儀器

材料

LS培養物、小鼠樹突狀細胞系、培養基、10%胎牛血清、青霉素-鏈霉素、4%十二烷基溶液、DAPI染色劑、多種單克隆抗體、心浸液瓊脂、酶聯免疫吸附測定試劑盒、小鼠T-激活劑CD3/CD28磁珠。

實驗動物：小鼠

儀器

ASCH VAPOSCAN 經皮水分流失測量儀、CellDrop細胞計數系統、BD FACSAria III細胞分選儀、酶聯免疫吸附測定相關檢測設備。

ASCH VAPOSCAN 經皮水分流失測量儀

「實驗過程」

本研究實驗分為體外實驗和體內實驗兩部分，同時對實驗數據進行專業統計分析，具體過程如下：

體外實驗：驗證LS的免疫調節與抗炎作用

1. 樹突狀細胞實驗：將70%融合度的DC2.4細胞以1×10?個/100μL的密度接種于96孔培養板，分別暴露于0、0.125、0.25、0.5、1mg/mL濃度的LS中，通過ELISA試劑盒定量檢測細胞上清液中IL-10和TNFα的濃度。

2. 角質形成細胞實驗：將70%融合度的HaCaT細胞以1×10?個/100μL的密度接種于96孔培養板，經重組人TNFα和IFNγ刺激1h后，加入含0、0.125、0.25、0.5、1mg/mL LS的培養基共培養24h，通過ELISA試劑盒定量檢測細胞上清液中IL-8和TARC的濃度。

體內實驗：探究LS經皮給藥對AD小鼠模型的治療與預防作用

1. AD小鼠模型構建：對NC/Nga小鼠經皮致敏Biostir AD，并經皮涂抹4%十二烷基溶液，構建特應性皮炎小鼠模型。

2. 治療性給藥實驗：在AD模型建立后的第19天（小鼠平均AD評分為2.07）開始給藥，實驗組每日經皮涂抹0.1mL/只的10% LS溶液，對照組每日經皮涂抹等體積去離子水，實驗期間每周監測小鼠的AD評分、背部皮膚厚度、TEWL；實驗結束后收集小鼠耳淋巴結樣本，制備單細胞懸液并計數，通過細胞分選儀分析免疫細胞亞群，通過磁珠刺激T細胞后采用ELISA檢測細胞因子水平，同時對小鼠皮膚樣本進行盲法半定量組織病理學評估。

3. 預防性給藥實驗：設置AD對照組和LS預防性處理組，對LS組小鼠提前進行10% LS溶液經皮給藥，后續監測指標、樣本檢測與分析方法與治療性給藥實驗一致。

數據統計分析

體外實驗采用方差分析結合鄧尼特多重比較檢驗；體內實驗采用雙因素方差分析結合?ídák多重比較檢驗或學生t檢驗，以5%為概率水平判定統計明顯性，所有數據通過GraphPad Prism 10分析，結果以平均值±標準誤表示。

「實驗結論」

副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母和釀酒酵母的混合微生物培養物（LS）具備免疫調節和抗炎作用。在體外培養中，LS能促進小鼠樹突狀細胞系DC2.4分泌IL-10和TNFα，并劑量依賴性地抑制經TNFα/IFNγ刺激的人表皮角質形成細胞系HaCaT產生IL-8和TARC。在AD小鼠模型中，治療性給藥未改善小鼠的臨床癥狀、皮膚厚度和經表皮失水量，但改善了皮膚角化層增生、表皮痂皮等組織病理學特征，同時降低了局部淋巴結中IgE陽性B細胞數量和IL-4水平；而預防性給藥效果更明顯，降低了AD臨床評分，改善了皮膚組織病理學特征，并減少了局部淋巴結中的效應T細胞數量和IL-13水平。整體而言，LS通過免疫調節和抗炎作用，能夠有效預防特應性皮炎的發生發展。