1、范圍

本標準規定了醫藥工業潔凈室和潔凈區中浮游菌測試條件、測試方法。

本標準適用于醫藥工業潔凈室和潔凈區，無菌室或局部空氣凈化區域(包括潔凈工作臺)的浮游菌的測試和環境的驗證。

本文件描述了醫藥工業潔凈室(區)浮游菌的測試方法。

本文件適用于醫藥工業潔凈室(區)潔凈廠房、潔凈實驗室等的浮游菌測試。

本文件不適用于在線監測系統。

1.2025版刪除"無菌室或局部空氣凈化區域(包括潔凈工作臺)的驗證"表述，

新增"潔凈廠房、潔凈實驗室";

2.2025版明確表述了新標準不適用"在線監測系統"，2010版無此限定。

2、規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的新版本。凡是不注日期的引用文件，其新版本適用于本標準。

GB/T16292-2010

JGJ71-1990潔凈室施工及驗收規范

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件B不K少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件，其新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

中華人民共和國藥典 2025年版 四部

1. 引用文件全部替換:

2010版引用GB/T16292-2010、JGJ71-1990,2025版僅引用《中華人民共和國藥典2025年版四部》;

2.引用文件表述規則調整，2025版明確"包括所有的修改單"，2010版為"不包括勘誤的內容"。

3、術語和定義

3.1菌落(colony forming units):微生物培養后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU，通常用個數表示。

3.2浮游菌(airborne microbe):用本標準提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。

3.3浮游菌濃度(airborne microbe concentration):單位體積空氣中含浮游菌菌落數的多少，以計數濃度表示，單位是個/m"或個兒。

3.4糾偏限度(action levels):對于受控的潔凈室(區)，由使用者自行設定微生物含量等級。當檢測結果超過該等級時，應啟動監測程序對該區域的微生物污染情況立即進行跟蹤。

3.5警戒限度(alert levels):對于受控的潔凈室(區)，由使用者自行設定一個微生物含量等級，從而給定了一個與正常狀態相比Z早警戒的偏差值。當超過該Z早警戒的偏差值時，應啟動保證工藝或環境不受影響的程序及相關措施。

3.1浮游菌(airborne microbe):懸浮在空氣中的活微生物。

注:本文件特指通過主動式采樣法收集到的懸浮在空氣中的活微生物。

3.2浮游菌濃度airborne microbe concentration

單位體積空氣中的浮游菌菌落數

注:浮游菌濃度的單位是菌落形成單位每立方米（CFU/m3）。

3.3

靜態 at-rest

潔凈室或潔凈區建成且設備就位,按議定的方式運行,但無人員在場的狀態。

[來源:GB/T25915.1—2021,3.3.2]

3.4

動態 operational

潔凈室或潔凈區設施按議定方式運行,且有規定數量的人員按議定方式工作的狀態。

[來源:GB/T25915.1—2021,3.3.3]

1. 新增術語:2025版新增"靜態"動態"術語及來源標注，2010版無;

2. 刪除術語:2025版刪除"菌落糾偏限度"警戒限度"，2010版有;

3.術語定義調整:2025版"浮游菌"生物。明確"主動式采樣法"，浮游菌濃度單位統一為CFU/m3；2010版沒有此要求；

4、人員要求

4.2人員的職責及培訓

潔凈室(區)的測試人員應進行本專業的培訓并獲得相應資格后才能履行對潔凈室(區)測試的職責，其中包含涉及的衛生知識和基本微生物知識。潔凈室(區)的測試人員應選擇與生產操作的空氣潔凈度級別要求相適應的穿戴方式，外面的衣服不能帶進100000級以上的區域。

潔凈室(區)的測試人員應接受衛生和微生物學基礎知識等相關專業知識的培訓,應使測試活動對潔凈室(區)的干預降至Z低。

1.培訓要求簡化:2025版刪除"獲得相應資格"的表述，2010版有;

2.新增干預要求:2025版要求"測試活動對潔凈室(區)的干預降至Z低"，2010版無;

3.穿戴要求刪除:2025版刪除 穿戴方式衣服帶入限制"，2010版有。

5、主要儀器設備

4.3儀器、輔助設備和培養基

選擇合適的浮游菌采樣器，包括采用無油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養基表面的水分不被吹干。本測試需要具備儀器、輔助設備和培養基如下:

a)浮游菌采樣器

b)培養皿;

c)培養基

(見本標準附錄B);

d)恒溫培養箱

e)高壓蒸汽滅菌器。

4.4浮游菌采樣器原理

浮游菌采樣器一般采用撞擊法機理,可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器，狹縫式采樣器由內部風機將氣流吸人，通過采樣器的狹縫式平板,將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養基表面上，附著的活微生物粒子經培養后形成菌落。離心式采樣器由于內部風機的高速旋轉，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養條上,附著的活微生物粒子經培養后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過一個金屬蓋吸人,蓋子上是密集的經過機械加工的特制小孔，通過風機將收集到的細小的空氣流直接撞擊到平板培養基表面上,附著的活微生物粒子經培養后形成菌落。

4.6培養皿

4.6.1一般采用90mmX15mm規格的培養皿。可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿。

4.6.2離心式采樣器采用專用的固形培養條。

5.1 采樣器

一般采用篩孔式撞擊采樣器。篩孔式撞擊采樣器的工作原理是:微生物氣溶膠在采樣器風機的抽

吸作用下,按慣性原理射向固體培養基表面,具有足夠大動量的帶菌粒子,由于慣性作用,沿原來方向直 線運動,不跟隨流體偏轉方向,撞擊在培養基表面而被采集下來。

應遵循說明書使用采樣器,并定期對采樣器進行校準。

注:目前用于浮游菌測試的采樣器還包括狹縫式撞擊采樣器、離心式撞擊采樣器、沖擊式采樣器、過濾式采樣器等。

5.2 其他儀器設備

培養箱、壓力蒸汽滅菌器等,應定期進行校準。

1. 采樣器細化:2025版明確"篩孔式撞擊采樣器"為主選，新增工作原理及其他采樣器類型注，2010版僅籠統提及"合適的浮游菌采樣器";些重

2. 設備名稱調整:2025版"高壓蒸汽滅菌器"改為"壓力蒸汽滅菌器"刪除"培養皿"(歸入采樣步驟)，2010版有;

3. 校準要求明確:2025版要求采樣器、其他儀器"定期校準"，2010版僅提及采樣器選擇要求。

4. 分類調整：2025版將采樣器分為篩孔式和其他（含狹縫式、離心式、沖擊式、過濾式），2010版分為狹縫式、離心式、針孔式；

5. 原理表述精簡：2025表述慣性撞擊；2010分成三類描述；

6. 采樣原理：2025版中5.1采樣器原文中包含采樣原理，

6、培養基

4.7培養基

大豆酪蛋白瓊脂培養基(TSA)或沙氏培養基(SDA)或其他用戶認可并經驗證了的培養基。其配制方法見附錄B.

6培養基

一般選擇胰酪大豆胨瓊脂培養基(TSA),必要時可加入適宜的中和劑。當監測結果有疑似真菌或考慮季節因素影響時,可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養基(SDA)。應符合《中華人民共和國藥典 2025年版 四部》9203相關要求。

1、名稱變化：大豆酪蛋白改為胰酪大豆胨；沙氏培養基改為沙氏葡萄糖瓊脂培養基

2、新增要求：2025新增中和劑；符合9203相關要求；2010版無

3、附錄刪除：附錄B，2025版刪除，2010版有

4、培養基差異：在2010版4.6.2中有固形培養條的描述，2025版中未提及。

7、測試條件

5.1測試條件

在測試之前,要對潔凈室(區)相關參數進行預先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環境條件,例如:這種預先測試或可包括:

a)溫度和相對濕度的測試。潔凈室(區)的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應(無特殊要求時,溫度在18C~26C，相對濕度在45%~65%為宜),同時應滿足測試儀器的使用范圍;

b)室內送風量或風速的測試,或壓差的測試;

C)高效過濾器的泄漏測試。

5.2測試狀態

靜態和動態兩種狀態均可進行測試。

靜態測試時，室內測試人員不得多于2人。

浮游菌測試前,被測潔凈室(區)由用戶決定是否需要預先消毒。測試報告中應標明測試時所采用的狀態和室內測試人員數。

5.3測試時間

5.3.1在空態或靜態a測試時，對單向流潔凈室(區)而言,測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于10min后開始。對非單向流潔凈室(區),測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于30min后開始.在靜態b測試時,對單向流潔凈室(區),測試宜在生產操作人員撤離現場并經過10min自凈后開始;對非單向流潔凈室(區),測試宜在生產操作人員撤離現場并經過20 min自凈后開始。

5.3.2在動態測試時,則須記錄生產開始的時間以及測試時間。

7測試條件

潔凈室(區)確認時,應在靜態和動態兩種占用狀態進行測試。潔凈室(區)常規監測時,應在動態條件下測試。

對單向流潔凈室(區)進行靜態測試時,宜在凈化空調系統正常運行時間不少于10min后開始,對非單向流潔凈室(區)進行靜態測試時,宜在凈化空調系統正常運行時間不少于30min后開始。

9 試驗報告

如適用,測試報告應至少包含以下內容:

a) 測試潔凈室(區)名稱、地址;

b) 測試潔凈室(區)占用狀態;

c) 測試潔凈室(區)環境條件;

d) 測試潔凈室(區)人數;

e) 生產時間;

f) 測試人數;

g) 測試時間;

h) 測試依據;

i) 采樣器信息;

j) 采樣點數目及布置圖;

k) 采樣量;

l) 培養基種類、培養條件、培養時間;

m) 每個采樣點浮游菌濃度。

1.預先測試刪除:2025版刪除"溫度、濕度、送風量、高效泄漏測試等預先測試要求，2010版有;

2.測試狀態明確:2025版區分"確認時(靜+動態)"常規監測(動態)"，2010版無此區分;

3.人員數量調整:2025版刪除"靜態測試人員2人"，僅要求報告測試人數;

4.預先消毒刪除:2025版刪除"用戶決定是否預先消毒"，2010版有;

5.狀態場景強化:2025版明確狀態適用場景(確認/常規監測)，2010版僅提及"均可測試"。

5.狀態分類刪除:2025版刪除"空態、靜態a、靜態b"分類及自凈時間，僅保留系統運行時間;

6.記錄要求保留:2025版保留動態測試"生產時間、測試時間"記錄，歸入試驗報告。

8.1確定采樣點

5.4浮游菌濃度計算

5.4.1采樣點數量及其布置5.4.1.1最少采樣點數目

浮游菌測試的最少采樣點數目可參照GB/T16292一2010。5.4.1.2采樣點的位置

浮游菌的采樣點位置可參照GB/T16292-2010。

a)工作區測點位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面);b)送風口測點位置離開送風面30cm左右;

c)可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。

采樣點布置的規則見附錄A。

8.1 確定采樣點

在進行潔凈室(區)確認及監測時,應基于風險評估確定采樣點數目及位置(含水平及垂直位置)。 宜選擇合適的風險管理工具,如故障模式效應分析(FMEA)、危害分析關鍵控制點(HACCP)等。

在通過風險評估確定采樣點時,應同時滿足表1最少采樣點數目的要求。

表1

公式1

1、明確要求：2025版給出了明確滿足表一及公式一+評估要求。取消了GB/T16292-2010參照標準，2010有

2、簡化位置要求：2025版刪除工作區0.8-1.5m及送風口間距30cm要求，僅提水平和垂直位置

3、刪除附錄:2025刪除附錄A（采樣點布置圖），2010有

8.2、采樣步驟

4.12注意事項

4.12.1使用前應仔細檢查每個培養皿的質量,培養基及培養皿有變質、破損或污染的不能使用。

4.12.2對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

4.12.3由于細菌種類繁多,差別甚大,計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別,必要時用顯微鏡鑒別。

5.4.2最小采樣量

浮游菌每次最小采樣量見表1。

5.4.3 采樣次數

每個采樣點一般采樣一次。

5.4.4采樣注意事項

5.4.4.1對于單向流潔凈室(區)或送風口,采樣器采樣口朝向應正對氣流方向;對于非單向流潔凈室(區),采樣口向上。

5.4.4.2布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。

5.4.4.3采樣時,測試人員應站在采樣口的下風側,并盡量少走動.

5.4.4.4應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。

5.4.4.5培養皿在用于檢測時,為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響,宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣,然后與采樣后的培養皿(TSA或SDA)一起放入培養箱內培養,結果應無菌落生長。

5.1采樣器

應遵循說明書使用采樣器,并定期對采樣器進行校準。

8.2 采樣步驟

8.2.1 按設定的采樣點放置采樣器。對于單向流潔凈室(區)或送風口,采樣器采樣口朝向應正對氣流

方向;對于非單向流潔凈室(區),采樣口向上。

8.2.2 放入采樣培養皿,設定采樣量,開啟采樣器進行采樣。每個采樣點最小采樣量宜按照表2進行。 每個采樣點采樣一次。

8.2.3 取同批次制備的培養皿作為陰性對照,與采樣培養皿同法操作但不進行暴露采樣,培養后陰性對照培養皿應無菌生長,否則測試無效。

1、培養皿/基檢查：2025版未提及，2010有；雖未提及但這是一個常識性的需要養成檢查的習慣，也是任何檢測操作都需要的步驟。

2、采樣次數：無差異每個采樣點一次。

3、放置方法：表述相同，朝上或正對。

4、潔凈級別擴展：2025版新增ISO對應級別（ISO5、ISO7、ISO8），從此國標對標國際標準有了指導依據2010無。

5、潔凈級別調整：2025版對300000級不做統一規定，2010版單次采樣量100L

6、狀態要求：2025版新增潔凈等級狀態要求（B、C、D動態、靜態）采樣量要求，2010無

7、人員要求：2025版刪除回風口回避、人員站位要求，2010版有有要求。

8、污染防控簡化：2025版刪除采取一切措施防止采樣污染的籠統表述，2010有。

9、陰性對照：2025版明確同批次的“無效判定”2010僅做“宜進行對照”。

8.3培養計數

4.10培養

4.10.1全部采樣結束后,將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

4.10.2采用大豆酪蛋白瓊脂培養基(TSA)配制的培養皿經采樣后,在30C~35C培養箱中培養,時間不少于2d;采用沙氏培養基(SDA)配制的培養皿經采樣后,在20C~25C培養箱中培養,時間不少于5d。

4.10.3每批培養基應有對照試驗,檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。

4.11菌落計數

4.11.1用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點計,然后用5~10倍放大鏡檢查,有否遺漏。

4.11.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊,可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

8.3 培養計數

8.3.1 采樣結束后,將培養皿倒置于培養箱中進行培養。

8.3.2 對于環境微生物種群不確定的情況,可在20℃~25℃培養3d~5d后再轉移至30 ℃~35 ℃培

3

GB/T16293—2025養2d~3d,或先在30℃~35℃培養2d~3d后再轉移至20℃~25℃培養3d~5d。當采用沙氏葡

萄糖瓊脂培養基(SDA)時,培養溫度為20 ℃~25 ℃,時間為5d~7d。宜根據環境污染微生物歷史數

據及種群特性調整培養方案。

8.3.3 用肉眼對培養皿上菌落直接計數標記或在菌落計數器上點計。

1、培養方案優化：2025版實行程式梯度培養方案；能夠應對各種不確定微生物種群；2010版采用恒溫培養；

2、培養時間優化：2025版TSA培養2d-3d；2010版培養不少于2d；SDA培養5d-7d；2010版表述不少于5d；

3、放大鏡檢查刪除：2025版刪除用5-10倍放大鏡檢查；2010版有；

4、重疊菌落刪除：2025版刪除平板菌落重疊項，2010版有

注：隨著新標準的實行，科技的進步，狹縫采樣使用的越來越少，篩孔式應用越來越廣泛，菌落計數器精度也越來越高，應用起來也更方便。

8.4結果表征

1、公式調整：2025版明確把采樣量L*1000換算成立方米（m3），2010版沒有明確，

2、單位變化：2025版明確單位為CFU/m3；2010版為個m3,或者個/L

3、示例刪除：2025版刪除示例

4、結果評定：2025版刪除結果評定條款，2010有

9、試驗報告

5.5記錄

測試報告應包含以下內容:

a)測試者的名稱和地址,測試日期;

b)測試依據;

c）被測潔凈室(區)的平面位置(必要時標注相鄰區域的平面位置);

d)有關測試儀器及其測試方法的描述:包括測試環境條件,采樣點數目以及布置圖,測試次數，采樣流量,或可能存在的測試方法的變更,測試儀器的檢定證書等;若為動態測試,則還應記錄現場操作人員數量及位置,現場運轉設備和數量和位置;

e)測試結果;包括所有統計計算資料。

9 試驗報告

如適用,測試報告應至少包含以下內容:

a) 測試潔凈室(區)名稱、地址;

b) 測試潔凈室(區)占用狀態;

c) 測試潔凈室(區)環境條件;

d) 測試潔凈室(區)人數;

e) 生產時間;

f) 測試人數;

g) 測試時間;

h) 測試依據;

i) 采樣器信息;

j) 采樣點數目及布置圖;

k) 采樣量;

l) 培養基種類、培養條件、培養時間;

m) 每個采樣點浮游菌濃度。

1、新增記錄：2025版新增“占用狀態”、“測試人數”、“培養基信息”、“采樣量”；2010版無。

2、表述調整：“測試者名稱地址”調整為“測試潔凈室（區）名稱、地址”、測試環境條件則單獨列出。

3、刪除項：2025版刪除相鄰區域標注、測試儀器檢定證書、設備數量和位置、統計計算資料

參考文獻

無

參 考 文 獻

[1] GB/T25915.1—2021 潔凈室及相關受控環境 第1部分:按粒子濃度劃分空氣潔凈度

等級

[2] GB/T16292—2025 醫藥工業潔凈室(區)懸浮粒子的測試方法

2025版明確了參考文獻，

2010版僅提出參考相關指南，并未列為參考文獻

奕泰凈科寫在最后：總的來說2025版的更新能更好的于ISO接軌，無論是條款、表述、流程等等的優化，都能更好體現以人為本、讓科技服務的理念，同時各項標準附錄的刪除，也更好的強化了《藥典》的存在，相關刪除的標準條款、附錄，可參考藥典。

奕泰凈科——潔凈有度，溫控有術、潔凈環境智能監測儀器、設備廠商

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